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Pierce™ 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒

Thermo Scientific Pierce 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒使用不到 10 µg 的抗體和磁性分離器可高度有效且高效地對抗原和蛋白復合物進行免疫沉淀 (IP) 和免疫共沉淀 (co-IP)。

經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒的特點：

•兼容—基于蛋白 A/G 重組蛋白的磁珠可確保與大多數(shù)一抗（無論來自小鼠還是兔）兼容
• 快速—免疫沉淀短至 30 分鐘，以降低背景并提高瞬時蛋白復合物的捕獲水平
• 潔凈—固定您的抗體，以防止洗脫液受到污染
• 耐受性—在存在去污劑、低 pH 值緩沖液或常見質(zhì)譜溶劑的情況下，不會浸出蛋白 A/G
• 高效—與其他磁珠相比，使用一半推薦體積的磁粒子進行免疫沉淀
• 便利—綜合 Co-IP 試劑盒包含磁珠和完整免疫沉淀實驗所需的所有必要緩沖液

本免疫沉淀試劑盒使用高質(zhì)量 Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 磁珠以及優(yōu)化的緩沖液和靈活的實驗方案以獲得高得率 IP 或 co-IP，其可使用手動或自動磁性分離工具。優(yōu)化的裂解/洗滌緩沖液優(yōu)化了抗體-抗原的得率和高效結(jié)合以及 co-IP 相互作用。相對溫和的低 pH 值洗脫緩沖液可使結(jié)合的免疫復合物與蛋白 A/G 分離?；蛘撸瑑?nèi)含的泳道標志物樣品緩沖液提供了快速的變性洗脫，用于 IP 產(chǎn)物的直接 SDS-PAGE 分析。

包括：
Pierce 蛋白 A/G 磁珠、裂解/洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、中和緩沖液及上樣緩沖液

使用磁粒子進行免疫沉淀與微珠狀瓊脂糖 IP 非常相似，只是使用磁鐵而非通過離心進行分離。首先將特異性抗體加入到樣品中，形成一種免疫復合物，然后與磁珠結(jié)合。洗滌復合物以去除未結(jié)合的材料，低 pH 值洗脫緩沖液可使結(jié)合的免疫復合物與蛋白 A/G 分離?；蛘?，包括泳道標志物樣品緩沖液，用于使用變性條件進行解離或者用于 SDS-PAGE 分析的下游樣品制備。該試劑盒包含 Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 磁珠（用于快速方便地對抗原進行磁性分離）以及優(yōu)化的緩沖液（用于提高抗原得率）。使用磁力架手動從溶液中取出磁珠或者使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 儀器等儀器通過自動化操作從溶液中取出磁珠。

通常已知更長時間的抗體-樣品孵育（2 小時到過夜）通常在 IP 測定中具有更高的得率。人們通常認為這種更高的得率與增加的背景有關(guān)。我們的研究人員發(fā)現(xiàn)過夜抗體-樣品結(jié)合然后使用 Pierce 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒進行免疫沉淀，通常會提高得率，但不會增加背景。因此，我們建議研究人員盡可能在至少 1 個小時內(nèi)執(zhí)行該結(jié)合步驟。

方案總結(jié)：
• 將細胞裂解物與 IP 抗體在室溫下孵育 1 至 2 小時或在 4oC 下過夜孵育。
• 使抗原-抗體復合物與蛋白 A/G 磁珠在室溫下結(jié)合 1 小時。
•使用 IP 裂解/洗滌緩沖液洗滌微珠兩次，并用純化水洗滌一次。
•洗脫抗原/抗體復合物。

Pierce™ 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒